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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞【HumanEyes:NormalRetinalPigmentEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分離自正常人視網(wǎng)膜組織，主要功能：（1）視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡(luò)膜和光感受器細(xì)胞外節(jié)之間。（2）視網(wǎng)膜色素上皮是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物通道。（3）視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃醇循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細(xì)胞外節(jié)以維持光感受器細(xì)胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和光感受器細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性。公司提供的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的組織采集于地方醫(yī)院，組織的采集根據(jù)公司批準(zhǔn)的方案進行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司產(chǎn)品人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(HumanEyesPrimaCell:NormalRetinalPigmentEpithelialCellsCatNo.3-0575)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項：
1. 接收到人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

以下是公司正在的產(chǎn)品：
小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞，NOR-10細(xì)胞 SAC-IIC3(腹水瘤細(xì)胞)鹽酸埃羅替尼（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Erlotinib hcl

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SK-N-SH爾它培南鈉;厄他培南鈉質(zhì)量規(guī)格：含量>90%,單鈉鹽Ertapenem

CST7 Others Human 人 Cystatin-F / CST7 / Cystatin-7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸苯海拉明質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRDiphenhydramine hydrochloride

大鼠癌細(xì)胞;MADB106鹽酸苯海拉明(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Diphenhydramine hydrochloride

IFNA7 Others Human 人 Ierferon alpha 7 / IFNA7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 聚肌苷酸質(zhì)量規(guī)格：≥90.0%,BRPolyinosinic acid
BxPC-3細(xì)胞，人原位胰腺腺癌細(xì)胞 人皮膚纖維微細(xì)胞系,Malmc細(xì)胞 小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-111酸苯丙哌啉（標(biāo)準(zhǔn)品）Benproperine phosphate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

HT-1080(人纖維肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2米諾地爾（標(biāo)準(zhǔn)品）Minoxidil質(zhì)量規(guī)格：含量測定

Gibco 17104019 Collagenase Type IV 1g7-羥基-4-甲基（標(biāo)準(zhǔn)品）7-Hydroxy-4-methylcoumarin質(zhì)量規(guī)格：≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品

人髓核細(xì)胞裂解物HNPCL7-羥基-4-甲基7-Hydroxy-4-methylcoumarin質(zhì)量規(guī)格：≥97%,BR

RSV-G Others Respiratory syncytial virus/RSV 人類呼吸道合胞 hRSV (A, rsb1734) glycoprotein G / RSV-G 桿狀-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 十一酸睪酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Testosterone undecanoate質(zhì)量規(guī)格：含量測定
人心肌細(xì)胞-cDNAHCM-a cDNA2'-羥基查耳酮(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)2'-Hydroxychalcone

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)(5×105)4-二甲基氨基-4'-硝基茋(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)4-Dimethylamino-4'-nitrostilbene

大鼠骨髓瘤細(xì)胞;IR983F4-甲氧基-4'-硝基芪(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)4-Methoxy-4'-nitrostilbene

雜交瘤(B類);Z153A2A5B3A12 小鼠牙細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL5-硝基尿嘧啶(>99.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)(T)5-Nitrouracil

LX-2, 人肝星形細(xì)胞株 Human2-羥基阿托伐他汀單鈉鹽二水合物2-Hydroxy Atorvastatin Dihydrate Mono Salt
人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞CM-H089人髂動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLDL-絲酸100克

IFNA13 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 月桂1 Myrcene,≥90.0% 123-35-3 25ML 通用試劑

人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞HIMEC叔丁醇 litxium tqrt-butoxidq 1907-33-1

HS68細(xì)胞，人男性正常細(xì)胞系 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞,RBL-1細(xì)胞 平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM溴綠-甲基紅指示劑溶液shēng huà shì jì容量：1克

MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14) 5×106cells/瓶×2125700-67-6O-本并三氮唑-N,N,N’，N’-四甲基脲四扶硼酸酯 (TBTU)(+4℃)2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetrametxyluronium tetrafluoroborate