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實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數規(guī)格：

產品名稱：鴨源雞桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

英文名稱：Gallibacterium anatis

貨號: GOY-M4035

產品規(guī)格：50T

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品及特點:

是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

fBupivacaine hydrochloride  18010-40-7  中文名：鹽酸布比卡因  分子式：C18H29ClN2O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠內皮脂肪酶(EL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Buergerinin G  263764-83-6  中文名：  分子式：C9H12O4  度：%  關鍵詞：  北玄參; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Bromhexine hydrochloride  611-75-6  中文名：鹽酸溴己新  分子式：C14H21Br2ClN2  度：98.0%      小鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Brinzolamide  138890-62-7  中文名：布林佐胺  分子式：C12H21N3O5S3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠胃動素(MTL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Bortezomib  179324-69-7  中文名：硼替佐米  分子式：C19H25BN4O4  度：98.0%      小鼠內皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠基質細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ethopabate  1959/6/3  中文名：乙氧酰胺苯甲酯  分子式：C12H15NO4  度：99.0%   

小鼠基質細胞衍生因子-1α   英文名稱：   somal-derived factor-1 a   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SDF-1α  Domperidone  中文名：多潘立酮  分子式：C22H24ClN5O2  度：98.0%

小鼠基質細胞衍生因子-1R(mouse SDF-1R)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Docetaxel  114977-28-5  中文名：多西他賽  分子式：C43H53NO14  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠基質細胞衍生因子-1R   英文名稱：   somal-derived factor-1 R   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SDF-1R  Domperidone  中文名：多潘立酮  分子式：C22H24ClN5O2 

小鼠基質細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Docosanoic acid  中文名：二十二烷酸  分子式：C22H44O2  度：%組織HSV1(HERPESSIMPLX1)病毒定性檢測試劑盒20次  2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  中文名：  分子式：C8H16O4  度：98.0%

組織HSV1(HERPESSIMPLX1)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次  2-(2'-Hydroxytetracosanoylamino)-octadecane-1,3,4-triol  154801-30-6  中文名：  分子式：C42H85NO5  度：96.0%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

組織HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性檢測試劑盒20次  2-(2'-Hydroxytetracosanoylamino)-octadecane-1,3,4-triol tetraacetate  中文名：  分子式：C50H93NO9  度：96.0%

組織HSV(HERPESSIMPLX)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次  2-(4-Chloro-3-hydroxy-1-butynyl)-5-(1,3-pentadiynyl)thiophene  26905-70-4  中文名：  分子式：C13H9ClOS  度：98.0%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

組織HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定性檢測試劑盒20次  (-)-Noe's Reagent  中文名：(-)-核歐沃豪斯效應試劑  分子式：C24H38O3  度：98.0%

鴨源雞桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Rosiglitazone  122320-73-4  中文名：羅格列酮  分子式：C18H19N3O3S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ropivacaine mesylate  854056-07-8  中文名：甲磺酸羅哌卡因  分子式：C18H30N2O4S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠肌球蛋白(MYS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Ropivacaine hydrochloride  98717-15-8  中文名：鹽酸羅哌卡因  分子式：C17H27ClN2O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠血栓調節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Roflumilast  162401-32-3  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠血清總補體(CH50)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Rizatriptan benzoate  145202-66-0  中文名：苯甲酸利扎曲坦  分子式：C22H25N5O2  度：98.0%      小鼠血清(NO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

服務流程：

鴨源雞桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1、根據客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數據、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）