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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

雜交流程

雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復(fù)性動(dòng)力學(xué)和熱穩(wěn)定性。雜交液的基礎(chǔ)成分為：Denhardt’s溶液（Ficoll，BSA，PVP），異源核酸（如鯡精3子DNA/tRNA/競(jìng)爭(zhēng)DNA），磷酸鈉，EDTA，SDS，鹽離子，甲酰胺和硫酸葡聚糖，以及雜交探針。不同的應(yīng)用中進(jìn)行雜交溫度、pH、鹽離子、甲酰胺、探針濃度等條件的優(yōu)化。常用的pH范圍為6.5~7.5，較高的pH值有助于提高雜交的嚴(yán)謹(jǐn)性。

原位雜交 (ISH) 是用于定位固定組織和細(xì)胞中特定核酸靶標(biāo)的強(qiáng)大技術(shù)，能夠獲得與基因表達(dá)和遺傳位點(diǎn)相關(guān)的時(shí)間和空間信息。 雖然ISH的基本工作流程與印跡雜交近似，即核酸探針被合成、標(biāo)記、純化和特異性靶標(biāo)退火，但其不同之處在于前者可通過可視化顯示組織內(nèi)的結(jié)果來獲得更多信息。 如今有兩種基本方法來實(shí)現(xiàn)可視化顯示原位RNA和DNA靶標(biāo)，即熒光 (FISH) 和顯色 (CISH) 檢測(cè)。 每種檢測(cè)方法本身的特點(diǎn)（見下表）使得FISH和CISH適用于截然不同的應(yīng)用。 雖然兩種方法均使用標(biāo)記的、與樣本雜交的靶標(biāo)特異性探針，但每種方法用于可視化顯示樣本的儀器不同。 這里我們將強(qiáng)調(diào)每種方法的不同之處和各自的優(yōu)勢(shì)。

武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司；公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái)；可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。

雜交技術(shù)zui重要的因素之一是選擇zui適的雜交反應(yīng)溫度。若反應(yīng)溫度低于Tm 10～15℃，堿基順序高度同源的互補(bǔ)鏈可形成穩(wěn)定的雙鏈，錯(cuò)配對(duì)減少。若反應(yīng)溫度再低（Tm-30℃），雖然互補(bǔ)鏈之間也可形成穩(wěn)定的雙鏈，但互補(bǔ)堿基配對(duì)減少，錯(cuò)配對(duì)增多、氫鍵結(jié)合的更弱。如兩個(gè)同源性在50%左右或更低些的DNA，調(diào)整雜交溫度可使它們之間的雜交率變化10倍，因此在實(shí)驗(yàn)前必須首先確定雜交溫度。通常有三種溫度可供試驗(yàn)，即zui適復(fù)性溫度、苛刻復(fù)性溫度及非苛刻復(fù)性溫度。溫度的選擇及溫度對(duì)雜交的影響見表18-3。

zui適復(fù)性溫度（Optimunm renaturation temperature, TOR）：Tor =Tm –25℃

苛刻復(fù)性溫度：Ts = Tm – (10或15℃)

非苛刻復(fù)性溫度：Tns =Tm – (30或35℃)