原位雜交檢測 原位雜交 植物組織原位雜交檢測
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原位雜交技術(shù)可應(yīng)用于什么方面

1.細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究。

2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測。

3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測。

4.基因在染色體上的定位。

5.檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。

6.分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳








雜交液中的陽離子濃度通過靜電排斥作用影響了雜交體之間的鏈穩(wěn)定性,較高的鹽濃度將增加雜交體的穩(wěn)定性。大于0.4M的Na離子濃度,對Tm值、雙鏈復(fù)性速率的影響不大,但隨著Na離子濃度的降低,將顯著影響Tm值和雙鏈復(fù)性速率。

有2機溶2劑(甲酰胺)的作用是降低DNA-DNA和DNA-RNA等雙鏈體的解鏈溫度。通常DNA需要在0.1~0.2M Na+ 90~100℃的條件下變性,那么應(yīng)用于原位雜交,樣品必須在65~75℃的條件下進行長時間變性,這將導(dǎo)致樣品形態(tài)學(xué)的破壞。50%甲酰胺的應(yīng)用能將雜交溫度降至30~45℃。

硫酸葡聚糖具有很強的水合性,高濃度的硫酸葡聚糖會使得核酸分子無法獲得周邊親水環(huán)境,增加了探針濃度,加快雜交反應(yīng)速率。



原位雜交組織(或細胞)化學(xué)技術(shù)簡稱原位雜交(In situ hybridization, ISH)是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標(biāo)記物的核酸探針與組織細胞內(nèi)待測的核酸,按堿基互補配對原則進行特異性結(jié)合,形成雜交體,然后用與標(biāo)記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng),通過組織化學(xué)或免3疫組織化學(xué)方法在核酸原有位置進行細胞內(nèi)定位、定性和定量研究。為分子水平研究細胞內(nèi)基因表達及有關(guān)細胞5因子的調(diào)控提供了有效的工具??梢暈榻M織化學(xué)與免3疫組織化學(xué)的重大突破。

原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保護組織和細胞的形態(tài),更能準確地反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。





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