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ATCC貨號(hào)：CRL-1573

293細(xì)胞 [HEK-293](胚腎細(xì)胞)傳代即去除原培養(yǎng)基并將細(xì)胞從原培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中，該過程可使細(xì)胞系或細(xì)胞株進(jìn)一步增殖。

接種后培養(yǎng)細(xì)胞的生長將從延滯期進(jìn)入對(duì)數(shù)期，即：細(xì)胞呈指數(shù)增殖。當(dāng)貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞已占據(jù)所有可用基質(zhì)、沒有擴(kuò)增空間，或者懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞已超過培養(yǎng)基所能支撐的能力，無法進(jìn)一步生長時(shí)，細(xì)胞增殖速度將大大降低甚至完全停止  。為了將細(xì)胞密度維持在*水平，以便細(xì)胞繼續(xù)生長，并且刺激其進(jìn)一步增殖，必須培養(yǎng)物分成若干部分，并添加新鮮培養(yǎng)基。

293細(xì)胞 [HEK-293](胚腎細(xì)胞)淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞呈球形，通常懸浮生長，不貼附在基質(zhì)表面。

293細(xì)胞 [HEK-293](胚腎細(xì)胞)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室

無菌工作區(qū)域：

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的主要要求是需要維持細(xì)胞培養(yǎng)工作區(qū)域處于無菌狀態(tài)。盡管*設(shè)置獨(dú)立的組織培養(yǎng)室，在較大的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)劃出的細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域同樣可用于無菌操作、孵育以及細(xì)胞培養(yǎng)物、試劑和培養(yǎng)基的儲(chǔ)存。獲得無菌條件的最為簡單、經(jīng)濟(jì)的方式就是使用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥  (即：生物安全柜)。

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥：

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥可提供無菌工作環(huán)境，同時(shí)限制多種微生物學(xué)操作產(chǎn)生的感染性潑濺或氣體揮發(fā)。目前已經(jīng)開發(fā)出 I 級(jí)、II 級(jí)和 III 級(jí)三種細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥，以適應(yīng)不同的研究和臨床需要。

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥的分類

I  級(jí)細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥配合良好的微生物學(xué)技術(shù)，可為實(shí)驗(yàn)室工作人員和環(huán)境提供相當(dāng)水平的防護(hù)，但是此類通風(fēng)櫥無法防止培養(yǎng)物污染，其在設(shè)計(jì)和空氣流動(dòng)性上均與化學(xué)通風(fēng)櫥類似。

II 級(jí)細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥用于涉及 BSL-1、2 和 3 級(jí)物質(zhì)的工作，同樣可為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)提供必需的無菌環(huán)境。II 級(jí)生物安全柜適用于操作可能具有危害的物質(zhì)  (例如：來源于靈長類動(dòng)物的培養(yǎng)物、被病毒感染的培養(yǎng)物、放射性同位素、致癌性或毒性試劑)。

III  級(jí)生物安全柜為氣密性設(shè)備，可為工作人員和環(huán)境提供能夠達(dá)到的*等級(jí)的防護(hù)。

III  級(jí)生物安全柜適用于涉及已知人類致病原及其他  BSL-4  級(jí)物質(zhì)的工作。

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥的氣流性質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥通過維持工作區(qū)域上方穩(wěn)定、單向的  HEPA 過濾空氣流動(dòng)，保護(hù)工作環(huán)境免受灰塵及其他空氣污染物污染。氣流可以呈水平方向，與工作臺(tái)面平行吹過，或者也可呈垂直方向，從通風(fēng)櫥上方吹向工作臺(tái)面。

根據(jù)設(shè)計(jì)的不同，水平流通風(fēng)櫥可為培養(yǎng)物  (即：空氣吹向使用者)  或者使用者  (即：空氣由通風(fēng)櫥內(nèi)的負(fù)壓經(jīng)前方吸入)  提供保護(hù)。而垂直流通風(fēng)櫥則可同時(shí)為使用者和培養(yǎng)的細(xì)胞提供良好的保護(hù)。

超凈工作臺(tái)水平層流或垂直橫流"超凈工作臺(tái)"不屬于生物安全柜；該設(shè)備可將  HEPA 過濾空氣由工作臺(tái)后方經(jīng)工作臺(tái)面吹向使用者，導(dǎo)致使用者可能接觸到有潛在危害的物質(zhì)。此設(shè)備只能為產(chǎn)品提供保護(hù)。超凈工作臺(tái)可用于某些潔凈操作，例如：無菌或電子設(shè)備的無塵組裝，不得用于操作細(xì)胞培養(yǎng)物質(zhì)或藥物配方以及可能具有的物質(zhì)。

有關(guān)生物安全柜的選擇、安裝和使用的更多信息，請(qǐng)參閱《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全》第五版

293細(xì)胞 [HEK-293](胚腎細(xì)胞)無菌技術(shù)核對(duì)表

以下核對(duì)表簡要列出了一些建議和方法，指導(dǎo)您切實(shí)使用無菌技術(shù)。

工作區(qū)域

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥設(shè)置是否正確？

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥所在區(qū)域有無氣流和直接出入通道？

工作臺(tái)面是否整潔？是否僅僅放置了實(shí)驗(yàn)所需的物品？

開始工作前用 70% 乙醇擦拭工作臺(tái)面了嗎？

是否定期對(duì)培養(yǎng)箱、冰箱、冰柜及其他實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行清潔和消毒？

個(gè)人衛(wèi)生

您洗手了嗎？

您穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備了嗎？

如果您留了長發(fā)，您把頭發(fā)扎在后面了嗎？

您是用移液器操作液體嗎？

試劑和培養(yǎng)基

您采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)實(shí)驗(yàn)室中配制的所有試劑、培養(yǎng)基和溶液進(jìn)行滅菌了嗎？

在將容器、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿放入工作臺(tái)面之前，您用 70% 乙醇擦拭其外部了嗎？

試劑瓶、培養(yǎng)瓶及其他容器不使用時(shí)蓋緊了嗎？

是否已將所有培養(yǎng)板均放入無菌重復(fù)密封袋中？

是否有試劑外觀渾濁？是否被污染了？試劑中有漂浮顆粒嗎？有難聞氣味嗎？有顏色異常嗎？如果出現(xiàn)上述情況，是否已對(duì)其進(jìn)行去污并丟棄？

操作

您操作時(shí)是否緩慢、謹(jǐn)慎、注意無菌技術(shù)了？

在將移液器、試劑瓶和培養(yǎng)瓶放入細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥之前，用 70% 乙醇擦拭其表面了嗎？

是否將蓋子口朝下放置在工作區(qū)域？

您是使用無菌玻璃吸管或者一次性無菌塑料吸管操作液體嗎？

無菌吸管是否僅僅使用一次以免交叉污染？

您是否注意到避免使吸管*觸碰到任何非滅菌物品包括瓶口螺紋的外緣？

發(fā)生液體潑濺時(shí)是否立即吸干并用 70% 乙醇擦拭該區(qū)域？

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