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TLC 方法原理

薄層色譜是一種微量分析的分離過程，它將樣品點在以玻璃板或鋁、塑料等片材為載體的多孔吸附劑薄層的固定相上，利用流動相在特定的展開室中將混合物中的組份推移到不同距離處，在色譜展開整個過程中，樣品的成份受到正反不同的力的作用。

1、 流動相利用毛細管力帶著樣品穿過固定相；

2、樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過程中由于偶極 -（誘導） - 偶極相互作用，氫鍵和范德華力的作用而產(chǎn)生不同程度的延緩、吸附、分散、離子交換和絡合等分離機理。

用顯色試劑處理，許多組份可在日光或紫外燈光下檢視。色譜可用肉眼或使用光密度計和照相機記錄或影像系統(tǒng)方法來評價。

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薄層色譜關(guān)鍵問題解讀

怎樣提高點樣效率？

點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注1射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注1射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上用同一只定量毛細管。

在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距離1-2cm底邊距離1.5cm；HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm底邊距1cm。

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TLC的通用顯色方法

理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：

1）、紫外照射法：方便、不破壞樣品；

2）、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用；

3）、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；

4）、硫酸溶劑：對絕大多數(shù)有機物有效，但有破壞性。

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