污网站在线观看视频,久视频久免费视频久免费,国产福利在线免费观看,一区二区三区乱码在线 | 中文

上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售豬藍(lán)耳?。ㄗ儺惗荆┮徊椒≧T-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購。

產(chǎn)品詳細(xì)信息

名稱：豬藍(lán)耳?。ㄗ儺惗荆┮徊椒≧T-PCR診斷試劑盒

規(guī)格： 20T/50T

品牌：上海滬崢

【操作步驟】

1.RNA提取

(1) 取疑似鴨病毒性肝炎的病料（*、*、淋巴結(jié)等）1~4g于無菌研缽，研磨并用PBS液（pH7.2~7.4）稀釋成1：4乳劑，分裝1.5ml滅菌EP管，反復(fù)凍融2~3次，8000r/min離心5分鐘。（病毒培養(yǎng)液，只需凍融1次即可8000r/min離心5分鐘）

（2）取200uL上清液（或標(biāo)準(zhǔn)品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。

（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，10000r/min離心5 min。

（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，加入300 uL 異丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均勻。

（5）將步驟4中的混合液移入制備管中，并將制備管置于同一2 ml離心管，10000 r/min離心1min。

（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，10000 r/min離心1 min。

（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min離心1 min。

（8）將制備管置回到2 ml離心管中，10000 r/min離心1 min。

（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

 3 .PCR操作                                                                                                               

4.電泳

稱量0.25g瓊脂糖，放入錐形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×濃縮液，儲存?zhèn)溆茫谖⒉t中熔解，加入1.5uL的TU-8混勻。封閉好電泳槽，加入梳子，倒入瓊脂凝膠，待凝固后，將PCR產(chǎn)物5uL混合1uL TU-7，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3uLTU-6，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

如果為藍(lán)耳病毒感染陽性，會有兩種電泳結(jié)果，一種為目的

片段低于500 bp（約470bp），為藍(lán)耳病毒變異株感染（Nsp2

基因缺失）；另一種結(jié)果為出現(xiàn)大于500bp片段（約為560bp），

為Nsp2基因未發(fā)生缺失的豬藍(lán)耳病毒感染。

    在450bp位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性

豬藍(lán)耳?。ㄗ儺惗荆┮徊椒≧T-PCR診斷試劑盒

【注意事項(xiàng)】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫擱置太久。

3. 盡量建立PCR試驗(yàn)操作區(qū)，避免交叉污染。

4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準(zhǔn)確造成無結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。